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        養好細胞注意點

        發布時間:2021-10-26 點擊量:278

        養好細胞注意點(二)

        (一)何時須更換培養基。培養基中是否須添加抗生素。


        視細胞生長密度而定,或遵照細胞株基本數據上的更換時間,按時更換培養基即可。


        一般正常培養狀態下,培養基中可以添加抗生素。 按1%體積分數加入雙抗貯存液(青霉素+鏈霉素),使青霉素和鏈霉素的終濃度分別為100 U/mL和100 μ/mL。


        (二)貼壁細胞傳代時所使用的 trypsin-EDTA 濃度及相應處理


        一般使用的 trypsin-EDTA 濃度為 0.25% trypsin-0.53mMEDTA.4 Na。第一次開瓶后應立即少量分裝于無菌試管中,保存于 –20 ℃,避免反復冷凍解凍造成 trypsin 的活性降低,并可減少污染的機會.。


        (三)將一般動物細胞離心下來,離心速率多少


        回收動物細胞,其離心速率一般為 1 000 rpm,5~10 分鐘,過高的轉速,將造成細胞死亡。


        (四)細胞的接種密度


        依照細胞株基本數據上的接種密度或稀釋分盤的比例接種即可。細胞數太少或稀釋的太多亦是造成細胞無法生長的重要原因之一。


        (五)細胞冷凍培養基的成分及DMSO的等級


        動物細胞冷凍保存時最常使用的冷凍培養基是含 5~10% DMSO (dimethyl sulfoxide) 和 90~95 % 原來細胞生長用的新鮮培養基均勻混合。注意:由于 DMSO 稀釋時會放出大量熱能,故不可將 DMSO 直接加入細胞液中,必須使用前先行配制完成。冷凍保存使用的 DMSO 等級,必須為 Tissue culture grade 的 DMSO ,其本身即為無菌狀況,第一次開瓶后應立即少量分裝于無菌試管中避光保存。


        (六)冷凍保存細胞的方法及冷凍細胞濃度


        將貼壁細胞消化后離心收集,懸浮細胞直接離心收集,以含有DMSO完全培養基或胎牛血清的凍存液重懸細胞至終濃度約1x106/ml。。以每管1~2ml分裝至凍存管中。用絕熱材料包裹置-70攝氏度冰箱冷凍過夜。次日保存到液氮中。 


        冷凍管內細胞數目一般為 1x106 cells/ml vial,融合瘤細胞則以 5x106 cells/ml vial 為宜。


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