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        SV40轉染人成骨細胞

        發布時間:2021-11-12 點擊量:249

        SV40轉染人成骨細胞;hFOB1.19

        發布時間:2021/11/1 10:48:58       關注度:13
        SV40轉染人成骨細胞
        Product Format: a T25 flask
        Culture Properties:貼壁
        Complete Growth Medium: 89%H-DMEM+10%FBS+1%雙抗
        Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
        Application:  Cells and cancer research
        NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY.
        (更多詳細具體說明書歡迎免費索?。?br/>
         
         
        Operation steps for cell culture
        1.吸走多余培養基,加入3-5mL PBS后輕輕晃動培養瓶潤洗細胞;
        2.吸干凈PBS后加入1mL 0.25%胰酶-0.53mM EDTA,輕輕搖晃培養皿使胰酶浸沒細胞表面,培養瓶放37度培養箱消化;
        (細胞對于消化比較敏感,消化過度會嚴重影響細胞狀態,導致細胞傳代死亡漂浮或者傳代后不長。細胞消化到細胞間隙變大但未脫落,可以輕輕吹下時即可終止,禁止消化到細胞漂浮?;靹蚣毎麜r盡量輕柔,不要吹出大量氣泡。)
        3.加入6-8ml培養基終止消化,輕輕吹下細胞混勻; 
        4.將混勻的細胞1000rpm(約150g)離心3min,棄上清,再用新鮮培養基重懸37度培養箱繼續培養;
        傳代比例: 不同細胞生長速度不一,具體傳代比例視細胞生長速度而定,大部分細胞適用1:3-1:4傳代,生長較慢的細胞可以1:2傳代。
        Cell cryopreservation
        1.凍存液:92%培養基+8%DMSO(可以根據實驗室條件自行選擇)
        2.降溫步驟:4度10min,-20度2h,-80過夜后液氮保存。
         
        Tips:
        1.細胞經過運輸后,部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片,是正?,F象。貼壁細胞可以消化,懸浮細胞直接混勻收集細胞,900-1000rpm(約150g)離心3min,棄上清。加5ml PBS重懸細胞,再900-1000rpm(約150g)離心3min,用新鮮的培養基重懸接種到新的培養瓶。第二次PBS重懸是為了去除碎片,如果平時碎片比較少,傳代時可以省略PBS重懸的步驟;如果碎片很多,建議PBS多洗幾次。
        2.細胞生長不均時,可以將細胞消化吹散后加入新的培養基重新接種或傳代。
        3.細胞生長緩慢時,可以選擇提高血清濃度培養(z高不超過20%),也可以根據細胞生長狀態,選擇傳代細胞到新的培養瓶中繼續培養。
        4.不同細胞貼壁性差異比較大,所以消化時間差別較大,20s-10min均有可能,具體以細胞消化到相互分離但未脫落,并可以輕輕吹下為準,嚴禁消化到細胞漂浮??蛻粝^度導致細胞死亡、漂浮、生長緩慢,不提供免費售后服務。
        5.干冰發貨均為兩支,客戶先復蘇一支,若復蘇失敗及時聯系我方并在我方指導下復蘇第二支。若客戶同時復蘇兩支均狀態不佳,我方不提供免費售后服務。
        6.細胞狀態正常時,應盡快凍存細胞保種,凍存后應隨機抽取一支檢測凍存效果。我方不對客戶凍存細胞導致死亡負責,客戶凍存細胞死亡不提供免費售后服務。


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