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        ATCC細胞基本操作程序

        發布時間:2022-05-23 點擊量:15
           ATCC細胞通常保存在凍存管中用干冰運輸,或是在培養瓶中常溫運輸。在不加任何條件下直接凍存細胞時,細胞內和外環境中的水都會形成冰晶,能導致細胞內發生機械損傷、電解質升高、滲透壓改變、脫水、PH改變、蛋白變性等,能引起細胞死亡。如向培養液加入保護劑,可使冰點降低。在緩慢的凍結條件下,能使細胞內水份在凍結前透出細胞。貯存在-130℃以下的低溫中能減少冰晶的形成。
          細胞復蘇時速度要快,使之迅速通過細胞zui易受損的-5~0℃,細胞仍能生長,活力受損不大。目前常用的保護劑為二甲亞砜(DMSO)和甘油,它們對細胞無毒性,分子量小,溶解度大,易穿透細胞。
          ATCC細胞操作程序(ATCC說明書有關于細胞復蘇和傳代的詳細步驟)
          1、細胞實驗室進行常規消毒,紫外照射40min以上。
          2、培養液(DMEM)、0.25%胰蛋白酶(Trypsin)恒溫水浴箱370C預熱20min,備用。
          3、二甲基亞砜(DMSO)在40C冰箱中冷藏30min,備用。
          4、從液氮保存罐中取出凍存管,立即放入400C水浴中,快速搖晃,直至凍存液完全融化。
          5、將細胞懸液移入15ml離心管,緩慢加入4ml培養液,離心(1000r/min,5min)。
          6、用培養液懸液混懸沉淀細胞,調整細胞濃度,方培養箱中培養。
          7、記錄復蘇日期。
          ATCC細胞注意事項:
          1、常規細胞培養儀器設備 恒溫水浴振蕩器。
          2、培養液(DMEM)胎牛血清(CBS)二甲基亞砜(DMSO)。
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